项目简介

       外泌体为大小30 ～100 nm 的细胞外泌性囊泡，具有脂质双层膜结构。近年研究显示，外泌体是细胞与细胞间通讯的重要的分子，参与诸多生理与病理过程。外泌体不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分，如微小 RNA( microRNA，miRNA) 、长链非编码RNA和mRNA、环状RNA（circular RNA，circRNA）。外泌体所携带的这些 RNA统称为外泌体来源 RNA，有望作为液体活检分子标志物，在精准医学发展上有着光明的前景。 

       表观生物采用Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit提取exosomal RNA，该试剂盒来源于美国Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡，并获得更为全面的RNA分子，适合用于检测外泌体中的环状RNA及其他长片段的线性RNA。 我们结合最新的高通量测序技术和生物信息分析方案，将为您提供最为全面的外泌体longRNA测序服务！ 

测序方案

1)    测序平台：Illumina HiSeq X10/Hiseq 4000

2)    测序模式：PE150

3)    测序数据量： 8G

4)    适用物种：人

5)    样本类型：仅限人血清或血浆，每个样本4ml体积

分析内容

1. 去接头污染，去低质量reads和测序质量评估

2. 参考基因组比对

3. 全基因组reads分布图谱

4. 环状RNA预测

5. 环状RNA表达差异分析

6. mRNA表达差异分析

7. 差异基因KEGG、GO分析

8. 差异lncRNA分析

参考案例

  来自复旦大学的科研人员首次发现了exosomes内含有大量circRNA。

        研究者从MHCC-LM3肝癌细胞以及此细胞来源的exosomes中分别提取总RNA（去除核糖体RNA），进行RNA-seq分析，发现exosomes中的circRNA比exosomes来源细胞中的circRNA丰富得多。

通过exosomal RNA测序方法，研究者发现人血清exosomes也含有大量完整稳定的circRNA，并且结直肠癌病人血清exosomes中的circRNA与正常人差异明显，肿瘤来源的exo-circRNA有望成为癌症检测的潜在生物标志物。 

(G) 血液中外泌体环状RNA在全基因组的位置分布  

(H) 血清外泌体环状RNA的序列长度分布(M) 正常人血清和直肠癌病人血清外泌体环状RNA的表达谱差异比较

                   (N) qRT-PCR 检测环状RNA分子circ-KLDHC10 的表达水平在正常血清和

                          直肠癌病人血清中有明显差异。